버섯종균기능사실기체크
# 버섯종균기능사 실기 체크
1. 무균실 작업 전 이미지 트레이닝을 해보는 것이 중요하다
가) 무균상에 비치된 기구들의 위치와 샤례 및 시험관등의 위치를 자신의 동선에
맞추어 재 배치하는 것이 중요하다. 샤례작업시 팔이나 손이 샤례위를 지나치는
것은 감점요인이다
나) 알콜살균과 화염살균의 습관화를 위한 집중이 필요
다) 포자수집 작업 작업준비 사항
손소독후 무균상을 열고 거즈나 소독한 휴지로 작업공간을 닦고 주어진 버섯을
왼쪽에 샤례를 몸 중앙에 놓고 작업거치대를 알콜램프 옆에 놓는다
버섯갓을 살짝 화염살균하고 버섯갓과 대를 화염소독한 칼로 분리하고 왼손으로
샤례의 뚜껑을 개봉하는데 이때 샤례의 뚜껑만 잡아 열고 오른손으로 거치할 재료를
화염살균후 샤례에 올려 놓는다
왼손에 들고있는 버섯갓을 거치한 샤례에 올려놓는다. 포자수집 작업이 끝나면
주변 정리 정돈을 깨끝이 하되 포자수집 작업 한곳위로 손이나 팔이 가지않도록.
주의점 : 작업시 뚜껑을 연 샤례위로 손이나 팔이 지나치지 않도록한다
라) 조직분리 작업
1) 시험관에서 시험관으로 이식
손소독후 무균상을 열고 소독한 거즈나 휴지로 작업대를 정리한다
원균이 들어있는 시험관을 아래쪽에 이식할 시험관을 위쪽으로 잡고 화염살균후
실리스토퍼를 열고 오른손 손가락에 끼운다
시험관을 화염살균하고 실리스토퍼를 화염살균후 메스를 잡고 화염살균한다
원균이 들어있는 시험관 가장자리 균사(배지끝의 0.5cm남김)를 메스로 잘라내고
백금구를 화염소독후 절편된 균사를 새배지가 든 시험관 중앙에 넣는다
백금구에 찍힌 균사절편을 새배지로 옮길때 새배지에 대고 3초간 누르고있으면
백금구에서 쉽게 배지로 옮길수있다
2) 샤례에서 샤례로 계대배양(이식).
무균실을 열기전 작업할 동선을 생각한다.
파라필름과 네임펜 그리고 휴지, 손을 살균하고 무균상을 연다
무균상을 깨끝이 닦고 생각했던 동선에 맞추어 실험도구를 세팅한다
알콜램프에 불을 붙이고 메스를 화염살균하고 균사가 있는 샤례와 배지만 있는
샤례를 화염살균하고 균사가 들어있는 샤례의 투껑을 여는데 손가락은 샤례의
윗부분만 살짝잡고 샤례를 개봉한다
샤례 가장자리에서 약 1cm에서 균자를 절편한다 3~5mm크기.
오른손으로 백금구를 화염살균후 절편한 균사를 찍고 새배지 샤례 중앙에 놓고
3~5초동안 약간 누르면서 기다린후 백금구를 들어 올리면 절편된 균사가 쉽게
떨어진다. 뚜껑을 닫은 샤례를 화염살균후 파라필름으로 밀폐시키고
날짜. 균사명. 이름을 쓰고 정리정돈을 한후 무균상을 닫는다
2. 배지 제조.
가) 감자한천배지
감자로 끓여서 만드는 방법 또는 PDA 39g으로 만드는 두가지가 있다
감자 200g 데트록스 20g 아가 20g
씨눈을 제거한 감자는 사방 1cm크기로 깍둑썰기를 하여 200g을 계량하고
물1,000ml를 정확하게 계량한후 끓인다 계량시 눈 높이에 주위한다
거름종이나 헝겊을 사용하여 계량할수 있는 컵이나 비이커에 감자입자를 제거후
데트록스와 한천을 넣고 1,000ml가 되도록 물을 보충한 후 한천이 녹을때까지
끓이는데 반드시 시약스푼으로 잘져어야 한다
한천이 녹으면 1,000ml 비이커에 계량하여 물을 보충한다
고압살균 20~30분간을 하는데 분주한 시험관(15~20ml) 비이커(1/3)에 호일로
감싸는 것을 잊으면 안된다.
다) 맥아배지 조제법
맥아 추출물 200g 펩톤 5g 한천 20g 증류수 1,000ml
(감자 한천배지 조제와 같다)
라) 퇴비 추출배지 조제법
양송이 건조퇴비 40g 맥아추출물 7g 데트록스 10g 한천 20g 증류수 1,000ml
마) 참나무 톱밥 추출배지 조제법
참나무톱밥 200g 데트록스 20g 맥아추출물 3g 한천 20g 증류수 1,000ml
바} 증류수한천배지
증류수 1,000ml 아가 20g
3. 고압살균 방법.
가) 액체배지는 20~30분 고체배지는 60~90분간 고압 살균한다
나) 고압살균을 할때 뚜껑을 열고 물의 양을 확인하고 옆에 배수구와 앞면의 배기
밸브가 잠겨있는지 확인한다
다) 배지는 반드시 호일로 쌓서 넣는다
라) 온도와 시간을 맞춘다
(대부분 고압살균기의 압력은 온도와 시간에 따라 자동 세팅된다)
마) 108도에 도달 했을 때 5분정도 배기 밸브를 조금 열어 놓는다
바) 5분후 배기 밸브를 잠그고 살균이 완료되기까지 기다린다.
사) 살균 완료시 가능한 자연배기가 되도록 하고 기압이 0기압이 되었을 때
온도가 70도 이하에서 뚜껑을 열어도 된다
아) 살균된 배지를 즉시 무균상에 옮긴다
자) 살균기 뒷정리를 깔끔하게 한다.
4. 알콜 소독제 70% 만들기.
에틸알콜은 순도 100%는 단백질 응고작용이 있어 주로 사용하는 알콜순도는 95%로
사용합니다
가) 95% 알콜로 70% 소독제 만드는 방법
원하는 농도 / 현재용액의 농도 x 최종부피 = 첨가할 부피
95%농도 에탄올로 70% 소독제만들기
1,000ml 일 경우 70% / 95 x 1,000ml = 알콜 737ml +물 263ml
500ml 일 경우 70% / 95 x 500ml = 알콜 369ml +물 131ml
250ml 일 경우 70% / 95 x 250ml = 알콜 185ml +물 65ml
5. 톱밥배지 제조
가) 버섯 종류별 배지제조를 요구할 경우를 대비한다
느타리 → 포플러톱밥 80% : 미강 20%
표고 → 참나무톱밥 80% : 미강 20%
팽이 → 버드나무 또는 느티나무톱밥 80% : 20%
버들송이→ 소나무톱밥 70% : 미강 30%
노루궁뎅이 → 참나무 40% : 포플러 40% : 미강 20%
목이 → 버드나무 25% : 참나무 65% : 미강 15%
영지 → 졸참나무 80% : 미강 20%
나) 톱밥배지 비율
1,000ml병에 톱밥배지 제조일경우 수분함량 65%로 만들려면
표고 . 느타리 톱밥 80% : 미강 20%
톱밥 600g + 미강 150g + 물 300ml
500ml병에 톱밥배지 제조일경우 수분함량 65%로 만들려면
표고 . 느타리 톱밥 80% : 미강 20%
톱밥 300g + 미강 75g + 물 150ml
250ml병에 톱밥배지 제조일경우 수분함량 65%로 만들려면
표고 . 느타리 톱밥 80% : 미강 20%
톱밥 150g + 미강 38g + 물 75ml
6. 곡립배지 제조
가) 배합비율 밀(삶은밀)1,000g + 황산칼슘(석고.결착방지) 20g + 탄산칼슘 10g(ph)
나) 솥에 밀을 넣고 밀이 잠길정도 물을 붓고 끓인다
삶는 과정에서 밀이 타지 않도록 계속 져어준다
다) 밀을 꺼내어 횡으로 절단 하였을 때 1~2mm정도 백색부분이 남아있고 외부가
투명할 때 가열을 중지한다 ( 완전히 삶으면 전분이 노출되어 덩어리가 생긴다)
라) 삶은 밀에 바람을 가하여 물기를 제거한다
마) 무게를 계량하여 1,000g에 석고 20g 탄산칼슘 10g을 섞는디
바) 1,000cc에 454g 약 2/3담는다.