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3. 한천배지상의 균사생장 측정법
균사생장 측정은 각종 균의 생리생태를 조사할 때 가장 기본적인 기술의 하나이다. 다른 시험과 마찬가지로 접종원으로는 사면배지나 평판배지에서 생장된 것을 이용하는 것이 좋다.
가. 샤레(petri-dish)를 이용한 측정
1) 균사체를 샤레의 중앙에 접종한다. 항온기에 넣어 적온으로 배양한다.
2) 균사의 신장이 1cm 정도되면 그 선단에 매직잉크로 표시를 한다. 샤레의 주위를 한바퀴 돌려가며 표시하는 것도 좋다.
3) n일 후에 다시 표시를 하고 그 사이에 신장한 량을 생장량으로 기록한다.
③ n일 후 표시한다
그림 2-3. 샤레를 이용한 균사생장량 측정
나. 라이안관(Rayan growth tube)을 이용한 측정
1) 분주에 필요한 모든 기구를 멸균한 후 60℃ 정도로 따뜻하게 해둔다. 원래 라이안관은 취급하기가 어렵기 때문에 배지는 테하식 분주기와 페리스타 펌프를 이용하여 무균적으로 주입하는 방법이 간편하다. 라이안관의 고정은 열로서 발포스티로폴을 홈에 붙혀서 행하면 편리하다.
2) 접종 후 조작은 샤레의 경우와 마찬가지이다. 라이안관은 길이가 기릭 때문에 현저하게 생장 속도가 빠른 균과 정확한 생장속도를 조사하는데 편리하다.
① 배지는 분주기와 페리스타 펌프 등을 ② 스치로폴에 홈을 파서 라이안관이
이용하여 무균적으로 주입한다. 넘어지지 않도록 고정한다
n 일간 생장량
④ n 일마다 표시하여 생장량을 구한다 ③ 굴곡부의 외측을 완만하게 접종한다
4. 톱밥배지상의 균사생장 측정법
1) 톱밥은 70℃에서 3～4일간 건조한 것을 표준량으로 한다.
2) 소정량 (습량기준 60～65%)의 물을 가하여 손으로 잘 혼합한다. 최적수분 함량의 조정은 수분측정계를 이용하는 것이 편리하다.
3) 톱밥을 혼합하여 시험관에 채운 후 중앙에 유리봉이나 나무가락으로 구멍을 뚫는다.
4) 톱밥 배지는 고압멸균시킨 후 (121℃, 30분간)에는 냉각시켜서 접종한다.
5) 접종원으로 쓰이는 균사가 자란 한천조각은 건조되면 활착하지 않은 경우가 있기 때문에 새로운 배지를 사용하지 않으면 안된다. 종구는 질적으로 균일하고 발균력도 강하기 때문에 사용하기가 쉽고 편리하다.
6) 균사생장량의 측정은 접종후 3～5일 간격으로 유성펜(네임펜)으로 균사선단에 표시를 하여 길이를 계측한다.
7) 톱밥은 나무를 절단하는 톱이나 나무 종류에 따라 다르며 용기에 담을 때 충진밀도에 따라 생장량은 변한다. 단단하게 충진 될수록 균사속도는 느리다.
※ 시험관에 톱밥과 물을 그대로 넣어 배지로 사용하는 경우 건조한 톱밥이 물을 잘 흡수하지 않기 때문에 물을 가하여 하룻밤 경과시킨 후 사용하는 것이 좋다.
① 건조기에서 70℃로 3～4일 ② 소정량(60 65%)의 물을 넣어
건조 손으로 잘 섞는다
③ 충진밀도가 균일하게 톱밥을 ④ 종구 또는 한천편을
채우고 중앙에 유리봉으로 접종한다
구멍을 내고 고압멸균한다.
5일간 생장량
⑤ 5일마다 균사 선단에 매직으로 표시한다
5. 액체배지에 의한 균체증가 측정법
1) 균사배양을 위한 배지량은 용기 용량의 10～20% 정도 채워야 한다.
2) 접종균사는 왕성한 균사편(CORK BORER로 떼어놓은 것)을 배지액체 표면에 접종한다.
3) 정치하여 소정기간 배양한다.
4) 미리 여과지의 절대 건조무게를 측정한 후에 이를 여과장치에 놓은 다음 3)과같이 배양한 배지의 전량을 흘려 넣는다. 알루미늄호일의 경우는 균체만 싼다.
5) 수세한 후 미리 측정한 표준병에 여과지만 넣어 80～105℃로 건조 후 중량을 정확히 측정한다.
6) 배양 균사편이 배양액 위에 떠 있어야 한다. 액중에 가라앉은 것은 생장이 나쁘다.
④ 미리 절대 건량을 측정한 ⑤ 미리 측정해둔 평량병에 여과 ※균체는 오른쪽처럼 배
여과지를 놓고 수세한다 지 자체를 그대로 넣어 80 ~ 150°C 제액 위에 떠있어야
에서 건조 후 평량 한다. 왼쪽처럼 배양액
에 잠겨 둥글게 뭉치면
생장에 좋지 않다.